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缔因安痰液样本预处理高效解决方案之痰液液化
2023-07-07


痰是人体呼吸道的分泌物,通过支气管上皮纤毛的运动,从肺部向上呼吸道推动,最后通过人的正常咳嗽反射从气管内咳出排出体外。人体正常情况下痰的量很少,只是保持呼吸道湿润而分泌的少量粘液。当人体吸入刺激性气体、尘埃以及一些致病细菌、病毒等有害微生物时,上呼吸道就可能发生炎症;或者肺部发生疾病,如支气管扩张、肺脓肿、肺癌等,呼吸道痰液就会分泌增加,痰液中包含多种病原微生物、各类炎症细胞、脱落坏死的黏膜上皮细胞以及肿瘤细胞等。因此,痰液中的病原体检测是呼吸道疾病检测的重要方式,通过检测痰液样本中病原体的核酸来鉴定病原体的种类是目前精准且快速的呼吸道病原体诊断方法之一。



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然而,痰液样本中包含粘蛋白和其他多种蛋白、多种酶类、脱落细胞、微生物以及其他吸入杂质等,具有粘度高、蛋白多、成分复杂等特点,对其直接进行核酸检测困难程度极高,需要对痰液样本进行液化降低粘度并安全释放出病原体中的核酸而不被降解,减少核酸检测抑制物的干扰。



常规痰液液化

方法及其不足




目前常见的痰液液化方法包括氢氧化钠法、DTT(二硫苏糖醇)法、蛋白酶法、蛋白酶法和DTT的组合方法以及由胍类和半胱氨酸衍生物等组成的痰液液化试剂。


1

氢氧化钠法

利用主成分为一定浓度的氢氧化钠溶液即可液化痰液。但该方法液化痰液时,会造成痰液中大部分病原体快速死亡从而导致核酸降解,最终导致病原体核酸的检出率偏低,且得到的液化样本难以直接用于后续的病原体核酸检测,往往需要在液化后先富集病原体沉淀,再进行核酸提取,操作比较复杂,而且很多对氢氧化钠溶液耐受性较低的病原体痰液样本并不适用该种液化方法。

2

蛋白酶法

原理是利用蛋白酶来消化痰液粘蛋白,该方法所需蛋白酶成本较高,且酶解反应耗时较长(一般37~65℃保温1~5小时),容易液化不均,且效率低。

3

DTT法

利用含巯基的DTT断裂痰液中导致粘稠的主要成分粘蛋白,该方法需要使用高浓度的DTT,耗时长,且往往需要离心操作,并且由于DTT稳定性差,需要在低温条件下保存,经该方法液化后的痰液经常液化不均,很容易从溶液状态转变为凝胶状态,且DTT具有一定的毒性,不适合临床上液化痰液样本时高浓度使用。

4

蛋白酶和DTT组合法

该方法一定程度上可以减缓液化后溶液状态的痰液向凝胶状态转变,但是仍需要使用成本较高的蛋白酶和较高浓度的DTT,由于使用蛋白酶液化痰液时需要在常温或以上条件下进行长时间的孵育操作,而DTT稳定性差需要低温保存,因此蛋白酶液化操作和DTT液化操作必须分步进行,从而也导致该方法操作繁琐,耗时较长,液化效率较低。

5

痰液液化试剂

虽然可以在常温条件下长效保护样本中的核酸,但是并不适用于高温处理条件下对裂解病原体释放的核酸进行有效保护,从而会造成阳性检出率偏低。




缔因安痰液

液化解决方案



缔因安SMART系列核酸提取仪通过对超声的精准控制,无需额外添加液化剂,直接在痰液样本中加入裂解液及磁珠,即可在仪器上完成痰液的匀浆、液化以及痰液中病原体核酸的提取全流程,整个过程不超过30min。



告别常规液化繁琐的操作步骤,缔因安SMART系列核酸提取仪对痰液液化更彻底,所提取核酸质量更高!为您提供更加优化、性价比更高的痰液液化以及病原体核酸提取解决方案!如您感兴趣试用或想了解更多信息,欢迎联系我们!



参考文献:

[1] 一种痰液液化方法及其专用液化试剂与流程,中国疾病预防控制中心,2022年4月21日.






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